پنج سیستم اصلی کروماتوگرافی مایع به شرح زیر است:
1. سیستم تزریق
معمولاً برای تکمیل عملیات تزریق از یک نمونهبر تزریق دیافراگم یا اتاق تزریق فشار بالا استفاده میشود و حجم تزریق ثابت است.
این برای بهبود تکرارپذیری نمونه های تحلیلی مفید است.
2. سیستم تزریق
این سیستم از سه بخش تشکیل شده است: یک پمپ فشار بالا، یک مخزن فاز متحرک و یک گرادیانتر. فشار عمومی یک پمپ فشار بالا 1.47~4.4X107Pa است و نرخ جریان قابل تنظیم و پایدار است. هنگامی که فاز متحرک پرفشار از ستون کروماتوگرافی عبور می کند، می تواند اثر انتشار نمونه را در ستون کاهش دهد و سرعت حرکت آن را در ستون تسریع کند. این برای بهبود وضوح، بازیابی نمونه و حفظ فعالیت بیولوژیکی نمونه مفید است. خطاها و گرادیانهای ذخیرهسازی فاز متحرک میتوانند فاز متحرک را با توجه به ویژگیهای فاز ثابت و نمونه تغییر دهند، از جمله تغییر قطبیت ماده شوینده، قدرت یون، مقدار pH یا تغییر به روشهای دیگر.
3. سیستم جداسازی
این سیستم شامل ستون های کروماتوگرافی، لوله های اتصال و ترموستات می باشد.
طول یک ستون کروماتوگرافی معمولاً 10-50 سانتی متر است (در صورت نیاز به دو در ترکیب، می توان یک لوله اتصال بین آن دو اضافه کرد)، با قطر داخلی 2-5 میلی متر. از فولاد ضد زنگ با کیفیت بالا، لوله شیشه ای با دیواره ضخیم، آلیاژ تیتانیوم و سایر مواد ساخته شده است. ستون مجهز به قطر 5-10 μ A فاز ثابت با اندازه ذرات m (متشکل از ماتریس و مایع ثابت) است که در آن ماتریس از رزین با مقاومت مکانیکی بالا یا سیلیکاژل تشکیل شده است که هر دوی آنها دارای ویژگی های بی اثر بودن (مانند حذف اساسی ژن های سیلیکات از سطح سیلیکاژل)، تخلخل و سطح ویژه بزرگ، علاوه بر این، سطح آن به صورت مکانیکی پوشش داده شده است (مشابه آماده سازی فازهای ساکن در کروماتوگرافی گازی) یا از نظر شیمیایی با ژن های مختلف (مانند فسفات، آمین چهارتایی، هیدروکسی متیل، فنیل، آمینو یا آلکیل گروه های زنجیره های کربنی با طول های مختلف) یا لیگاندها جفت شده است.
بنابراین، این نوع مواد با ساختارهای نسبی ثابت مختلف، گزینش پذیری خوبی دارند. به عنوان مثال، با جفت کردن لکتین نخود (PSA) روی سطح سیلیکاژل متخلخل، می توان یک گلیکوپروتئین را از فیبروبلاست ها جدا کرد. علاوه بر این، پلاسمید فاز ساکن کوچک است و بستر ستون به راحتی می تواند به یک حالت یکنواخت و متراکم دست یابد، که می تواند اثر انتشار جریان گردابی را تا حد زیادی کاهش دهد. ماتریس دارای اندازه ذرات کوچک و ریزمنافذ کم عمق است و نمونه دارای انتقال جرم کوتاه در ناحیه ریز متخلخل است. اینها برای کاهش پهنای باند و بهبود وضوح مفید هستند. بر اساس تحلیل تئوری بازده ستون، هرچه اندازه ذرات ماتریس کوچکتر باشد، عدد نظری N سینی بزرگتر است.
4. سیستم تشخیص
سه آشکارساز متداول برای کروماتوگرافی مایع وجود دارد: آشکارساز UV، آشکارساز ضریب شکست افتراقی و آشکارساز فلورسانس.
آشکارساز UV
این آشکارساز برای تشخیص نمونه هایی با عملکرد جذب نور فرابنفش (یا نور مرئی) مناسب است.
ویژگی های آن: طیف گسترده ای از کاربردها (مانند پروتئین ها، اسیدهای نوکلئیک، اسیدهای آمینه، نوکلئوتیدها، پپتیدها، هورمون ها و غیره می توانند استفاده شوند). حساسیت بالا (محدودیت تشخیص 10-10 گرم در میلی لیتر)؛ محدوده خطی گسترده؛ به تغییرات دما و سرعت جریان حساس نیست. می تواند نمونه های شسته شده توسط محلول گرادیان را تشخیص دهد.
5. سیستم پردازش داده ها
این سیستم میتواند دادههای آزمایش را جمعآوری، ذخیره، نمایش، چاپ و پردازش کند و جداسازی، آمادهسازی یا شناسایی مناسب نمونهها را ممکن میسازد.
به طور خلاصه، کروماتوگراف مایع شامل یک سیستم نمونه، یک سیستم تزریق، یک سیستم جداسازی، یک سیستم تشخیص و یک سیستم پردازش داده است. ترکیب این سیستم ها آزمایش را قابل اعتمادتر و پایدارتر می کند.